- 雷永红;付小兵;袁方;蔡飒;孙同柱;
目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法:密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞(hMSCs),流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSCs。实验分3组:直接共培养组(n=8)为hMSCs(1×105/ml)与人表皮角质形成细胞(HEKa)直接接触共培养;间接共培养组(n=7)为在transwell透明聚碳酸酯膜上层加入hMSCs细胞悬液[(2~3)×105个细胞)],下层接种HEKa,间接共培养;单纯HEKa培养组(n=7)单纯培养HEKa。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的HEKa细胞以制备宽度为100μm的"表皮创面"模型。模型制备后24、48、72h,倒置相差显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的HEKa数,并用SigmaScanPro5软件计算创面愈合率,检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性,判定HEKa细胞的分裂增殖活性。结果:流式细胞仪检测第二代hMSCsCD29、CD44和CD106抗原阳性(分别为94.81%、95.38%、97.40%),CD14、CD34、CD45抗原阴性(分别为1.23%、3.05%、2.64%);直接培养组、间接培养组和单纯HEKa培养组越过创缘进入创面的细胞伤后24h分别有(10.00±0.25)、(5.50±0.20)和(5.20±0.35)个/高倍视野;48h分别有(55.30±0.22)、(27.00±0.34)和(26.50±0.25)个/高倍视野;72h分别有(110.50±0.45)、(42.50±0.50)、(40.20±0.38)个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为(60.00±0.04)%,(35.00±0.01)%、(33.00±0.05)%。脱氧胸腺嘧啶苷掺入培养基法表明hMSCs对体外共培养HEKa细胞的增殖作用分别为(1650±270)cpm/105 cell、(1240±210)cpm/105 cell、(1180±220)cpm/105 cell。上述各指标直接共培养组与单纯HEKa培养组比较,差异有显著性(P<0.01),而间接培养组与单纯HEKa培养组间差异无显著性(P>0.05)。提示共培养体系中的hMSCs导致HEKa分裂增殖速度增加,迁移到创面细胞数量增加,创面愈合速率增加。结论:hMSCs通过与表皮细胞接触可以促进其分裂增殖和迁移而加快创面愈合,hMSCs可参与皮肤损伤的修复。
2008年02期 72-76+64页 [查看摘要][在线阅读][下载 927K] - 黄宏;张波;朱方强;孙宏振;冯帅南;王正国;朱佩芳;
目的:探讨脂肪组织来源的干细胞(ADSCs)表达外源性基因的可能性。方法:取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过I型胶原酶消化、离心等方法分离培养ADSCs,再经原代培养和传代培养。利用成骨诱导剂(10-7mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L左旋抗坏血酸)诱导ADSCs向成骨方向分化,观察其生长形态,并通过Gomori改良钙钴法和von Kossa染色对其成骨表型进行鉴定。另设一对照组,培养基中不加入成骨诱导剂。脂质体介导人内皮细胞生长因子(hVEGF)和骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)转染ADSCs细胞,观察转染后细胞形态和生长情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法分别检测hVEGF mRNA、BMP-2 mRNA及其蛋白质表达。结果:成骨诱导剂能显著诱导体外培养的ADSCs向成骨细胞分化,诱导19d的ADSCs体积增大,细胞由梭形变为多边形,Gomori改良钙钴法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒,诱导15d和19d,碱性磷酸酶阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%。von Kossa染色表明聚集的细胞团中央有钙化结节形成。RT-PCR检测证实,经质粒转染的ADSCs中hVEGF和hBMP-2基因表达明显增强,对照组呈弱表达。免疫组织化学检测证实转染ADSCs内有棕色的阳性颗粒出现,未转染细胞则呈现阴性。结论:ADSCs能被成功诱导为成骨细胞,hVEGF和hBMP-2基因能成功地转入ADSCs并表达,这为促进骨组织工程的血管化和成骨活性奠定了基础。
2008年02期 77-81+129页 [查看摘要][在线阅读][下载 477K] - 李平;熊仁平;刘苹;赵艳;朱敏;周元国;
目的:克隆和测定Wistar大鼠smad3基因部分序列,构建检测Wistar大鼠smad3基因表达的重组质粒标准品并建立实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法。方法:提取并培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞的总RNA,逆转录(RT)-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上,测序分析。用已测定序列的T载体作为标准品建立实时荧光定量PCR方法,并检测转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激对培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3 mRNA表达的影响。结果:测定Wistar大鼠smad3基因cDNA序列长415bp,其与人、家鼠、小鼠具有较高的同源性,已被GenBank收录(DQ409172)。建立的实时荧光定量PCR方法在103~107拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内相关系数为0.98946。25ng/ml TGF-β1刺激后Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3基因表达升高为PBS刺激对照组的1.5倍。结论:获得Wistar大鼠smad3基因序列并成功建立了smad3实时荧光定量PCR的方法,为Smad3作用的分子机制研究提供了实验基础。
2008年02期 82-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 716K] - 张翠萍;付小兵;李淑云;孙同柱;
目的:观察高钙培养后表皮角质细胞的形态、生长特点及角蛋白表达的变化,进一步探讨钙在促进表皮角质细胞分化过程中的重要作用。方法:表皮角质细胞分别在低钙(0.05mmol/L)和高钙(1.2mmol/L)环境条件下培养1~2d,光镜下观察细胞的形态和生长特点,并采用免疫组织化学方法检测表皮角质细胞中角蛋白10(K10)、K14和K19的表达水平。结果:低钙培养的表皮角质细胞散在生长,分布均匀,细胞间隙较大,胞膜圆滑,边界清楚。高钙培养后,细胞胞体变得扁平,细胞间隙消失,并且细胞出现明显的成簇生长趋势。在正常培养即低钙培养条件下,K10和K19阳性细胞比例较少,所培养的细胞几乎全为K14阳性细胞;在高钙培养条件下,K10和K19阳性细胞比例明显增加,而K14的表达没有明显变化。结论:高钙培养能改变表皮角质细胞的形态和生长特点并提高细胞内角蛋白的表达水平,从而促进表皮角质细胞的分化成熟。
2008年02期 87-89+64页 [查看摘要][在线阅读][下载 544K] - 孙荣距;夏照帆;杨宗城;姚咏明;赵晓东;苏踊跃;罗向东;
目的:通过p21基因调控序列E-box位点的突变分析,研究E-box位点对p21基因表达调控的作用。方法:将人野生型p21基因启动子全长序列构建到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic,并进一步对重组载体pGL3-p21p启动子E-box位点做定点突变,构建突变载体E1、E2、E3,分别转染人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304细胞),DLR系统测定荧光素酶活性,并观察E-box位点突变前后荧光素酶活性变化。结果:测序结果表明野生型pGL3-p21p及突变载体E1、E2、E3构建成功。野生型pGL3-p21p荧光素酶活性(105.82±16.55)明显高于空载体pGL3-basic(1.56±0.62);突变载体E1、E2、E3的荧光素酶活性(70.71±16.46、37.87±3.26、83.25±11.48)较野生型载体不同程度下降(P<0.01)。结论:p21基因启动子某些E-box位点参与了p21基因的表达调控。
2008年02期 90-93页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K] - 杨丽萍;姚咏明;
目的:构建基于转录激活因子(TAT)技术的细胞外信号调节激酶(ERK)2及其无活性突变体ERK2(AF)原核载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)技术从pcDNA3-Flag-ERK2和pcDNA3-Flag-ERK2(AF)质粒中扩增出ERK2和ERK2(AF)基因,插入pET14b-His-TAT载体中,构建重组质粒pET14b-His-TAT-ERK2和pET14b-His-TAT-ERK2(AF),并诱导原核表达、纯化融合蛋白。采用Western blot方法检测表达蛋白的His标签。结果:酶切和测序结果表明,扩增的ERK2和ERK2(AF)基因正确,大小为1082bp;10%SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白,大小为41 kD;Western blot检测显示,原核蛋白带有His标签。结论:成功构建了ERK2和ERK2(AF)的原核表达载体,该载体能在大肠杆菌中表达,纯化得到了His-TAT-ERK2和His-TAT-ERK2(AF)蛋白,为研究ERK2蛋白的功能提供了重要工具。
2008年02期 94-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K] - 郭青;李振彩;皮裕琍;刘俭;董莹;
目的:探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者视网膜中央动脉(CRA)的血流变化规律,分析DR病程进展的相关因素。方法:应用彩色多普勒超声检测31例糖尿病患者(62眼)和14例正常对照者(19眼)的CRA收缩期血流峰值速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)、阻力指数(RI),同时行眼部检查,记录病史、并发症、糖化血红蛋白和血尿素氮数值。结果:CRA的PSV、EDV随视网膜病变程度的加重逐渐减降低,RI随视网膜病变程度的加重逐渐升高。在糖尿病无视网膜病变(NDR)组(10例,20眼)、背景型视网膜病变(BDR)组(11例,22眼)、增殖型视网膜病变(PDR)组(10例,20眼)中,CRA的PSV、EDV、RI与正常对照组比较均有显著差异(P<0.05)。随着糖尿病视网膜病变的加重,周围神经损伤的发生明显增加,BDR组中周围神经损伤发生率为17%(7/41例),PDR组中周围神经损伤发生率为73%(11/15例)。BDR、PDR组中糖化血红蛋白明显高于NDR组;PDR组中尿素氮水平明显高于NDR、BDR组,差异有显著性(P<0.05)。结论:在无视网膜病变的糖尿病患者视网膜血流动力学已发生变化,血流参数的变化可以动态监测视网膜病变的程度。糖尿病视网膜病变的进展与糖化血红蛋白、尿素氮水平以及是否有周围神经损伤密切相关。
2008年02期 98-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 91K] - 王世斌;费阳;谭向龙;姚胜;李基业;
目的探讨新辅助化疗对局部晚期乳腺癌的疗效。方法对56例行新辅助化疗的局部晚期乳腺癌患者的临床资料进行总结分析。56例患者中ⅢA期30例,ⅢB期15例,ⅢC期11例。采用AC方案(环磷酰胺600mg/m2静脉滴注,阿霉素60mg/m2或表阿霉素90mg/m2静脉滴注,第1日,21d为1个周期)或ET方案(表阿霉素90mg/m2静脉滴注,第1日;多西他塞75mg/m2静脉滴注,第2日;地塞米松16mg/d,第1~3日口服,21d为1个周期)。化疗3~4个周期后观察疗效,结果全部患者临床有效率(完全缓解+部分缓解)为71.5%(40/56例),临床获益率(完全缓解+部分缓解+病情稳定)为95.4%,病理完全缓解率8.9%(5/56例)。38例(67.9%)重获根治手术机会,中位随访时间40个月,总生存率为62.5%(35/56例),无瘤生存率为39.3%(22/56例)。结论新辅助化疗能降低局部晚期乳腺癌术前TNM分期,使部分患者重获根治性手术机会。
2008年02期 101-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 86K] - 蒋红清;刘亚杰;李亚里;
目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体(单抗)对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的抑制作用,为从抗血管途径治疗EMs提供依据。方法:60只新鲜受精鸡蛋随机分为接种组(20枚)、接种治疗组(20枚)、单纯空白组(10枚)和空白载体组(10枚)。接种组和接种治疗组建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,接种治疗组给予VEGF单抗10μg/d。单纯空白组不接种子宫内膜,空白载体组以无菌明胶海绵为载体,给予PBS20μg/d。通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和VEGF单抗对异位内膜病灶生长行为的影响。结果:接种组CAM血管生成反应明显增强,血管数目显著高于单纯空白组和空白载体组;接种治疗组血管数目显著低于接种组,有明显的间质坏死。结论:子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,VEGF单抗能够显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长,证实抗血管途径可以作为治疗EMs的一种有效方法。
2008年02期 104-106+129页 [查看摘要][在线阅读][下载 393K] - 窦懿;廖镇江;
目的:分析上海瑞金医院灼伤科2002-2006年住院患者金黄色葡萄球菌耐药率的变化和抗菌药物的使用情况,为合理应用抗菌药物提供依据。方法:调查上海瑞金医院2002-2006年灼伤病房细菌的流行病学,抗菌药物的使用量以及金黄色葡萄球菌的耐药变化。结果:①病房分离的主要细菌是金黄色葡萄球菌(29.48%~41.06%)和铜绿假单胞菌(15.59%~23.39%)。②头孢拉定(80.45~286.34DDDs/100住院人天)、头孢哌酮(11.64~238.97 DDDs/100住院人天)等β-内酰胺类抗生素是病房使用最多的抗菌药物,万古霉素(43.19~82.18 DDDs/100住院人天)、阿米卡星(38.99~125.52 DDDs/100住院人天)、环丙沙星(1.96~163.41 DDDs/100住院人天)的使用量也比较大。③金黄色葡萄球菌对几种常用抗菌药物的耐药情况研究显示,青霉素(98.0%~100.0%)、阿米卡星(72.4%~86.1%)、头孢唑啉(68.5%~85.1%)、环丙沙星(51.5%~81.2%)、苯唑西林(72.7%~85.1%)耐药率都比较高,而万古霉素尚未发现耐药菌株。青霉素和阿米卡星的耐药情况较严重,使用量也有相应减少。环丙沙星的耐药情况有所缓解,使用量则相应增加。结论:病房金黄色葡萄球菌的耐药情况比较严重,临床必须严格掌握抗菌药物的使用指证,根据药敏结果选择合适的抗菌药物,通过联合用药、选择不常用的敏感抗菌药物、减少耐药严重的抗菌药物的使用等手段来缓解细菌耐药情况。
2008年02期 107-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 507K] - 刘雪梅;欧龙;马婷婷;
目的:探讨缺损至龈下或龈上部分健康牙体组织不足的后牙残根残冠如何保留及修复。方法:对32例患者的47颗缺损牙残根残冠行冠延长术,重新建立正常的生物学宽度后行插销式核桩冠修复。结果:冠修复后随访0.5~2年,无自觉不适,咀嚼功能良好。临床检查修复牙无松动,无叩痛,牙龈无红肿。X线牙片显示牙周、尖周、牙槽嵴无异常。结论:缺损至龈下或龈上部分健康牙体组织不足的后牙残根残冠,通过冠延长术后行插销式桩核冠修复,均获得满意疗效。
2008年02期 112-113页 [查看摘要][在线阅读][下载 57K]